# Preparation of a dual-specific antibody targeting human CD123 and exploration of its anti-acute myeloid leukemia effects

## TL;DR

This study creates a new dual-specific antibody targeting CD123 and shows it can activate T cells to fight acute myeloid leukemia in lab tests.

## Contribution

A novel CD123-targeting dual-specific antibody was constructed and shown to enhance T cell anti-leukemia activity in vitro.

## Key findings

- CD123 DuAb activates T cells, increasing CD69 and CD25 expression significantly compared to controls.
- The antibody promotes T cell proliferation and enhances their ability to kill CD123-positive leukemia cells.
- Higher CD123 DuAb concentrations increase T cell activation but also lead to increased T cell exhaustion and apoptosis.

## Abstract

构建一种新的靶向CD123抗原的双特异性抗体（CD123 DuAb），研究CD123DuAb在急性髓系白血病（AML）治疗中的作用。

以自主研发的CD123单克隆抗体可变区为基础，利用分子克隆技术，构建CD123 DuAb表达质粒，转染ExpiCHO-S细胞，表达该双功能抗体。通过功能实验，验证CD123 DuAb在T细胞活化及增殖中的作用，及其促进T细胞对AML细胞的杀伤作用。

①构建了CD123 DuAb表达质粒，并通过Expi-CHO真核系统表达。②CD123 DuAb可以分别与T细胞上的CD3位点及CD123阳性肿瘤细胞上的CD123位点结合。③将1 nmol/L CD123 DuAb加入T细胞与MV4-11细胞共培养体系中，T细胞中CD69阳性表达率为68.0％，CD25阳性表达率为44.3％，均显著高于对照组（P值均<0.05）。④在CD123 DuAb浓度为1 nmol/L的条件下培养T细胞，可促进T细胞增殖，其绝对计数第1天为5×105/ml，第9天扩增至3.2×106/ml，且CFSE荧光强度显著降低。⑤CD123 DuAb能够显著激活T细胞，且激活强度与其浓度呈正相关，浓度为1 nmol/L时，T细胞CD107a表达率可达16.05％，较对照组显著升高（P<0.05）。⑥随培养体系中CD123 DuAb浓度的升高，T细胞耗竭和凋亡也随之增加，浓度为1 nmol/L时，T细胞CD8+PD-1+LAG-3+比例为10.90％，PI−Annexin Ⅴ+比例为18.27％，PI+Annexin Ⅴ+比例为11.43％，均较对照组显著升高（P<0.05）。⑦CD123 DuAb能够促进T细胞分泌细胞因子，浓度为1 nmol/L时，共培养体系上清中的IFN-γ和TNF-α的浓度可分别达到193.8 pg/ml和169.8 pg/ml，较对照组显著升高（P<0.05）。⑧将CD123 DuAb以1 nmol/L的浓度加入T细胞与CD123阳性肿瘤细胞共培养体系中，能显著增强T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，共培养3 d，CD123+MV4-11细胞、CD123+Molm13细胞和CD123+THP-1细胞的残留率分别为7.4％、6.7％和14.6％，较对照组显著降低（P<0.05）。

本研究构建及表达了一种靶向CD123的双特异性抗体，并通过体外实验验证其可以同时结合CD123阳性肿瘤细胞和T细胞，促进T细胞的活化和增殖，增强其抗白血病作用，为进一步临床研究提供了基础。